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技術簡介

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,雜交后再通過免疫細胞化學過程連接上熒光染料 。
 

 





技術原理
 

如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的,二者經變性-退火-復性,即可形成靶DNA與
核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛,可利用該報告分子與熒光素標記的特
異親和素之間的免疫化學反應,經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。



技術優勢
 
1、 熒光試劑和探針經濟、安全;
2、 探針穩定,一次標記后可在兩年內使用;
3、 實驗周期短、能迅速得到結果、特異性好、定位準確;
4、 FISH可定位長度在1kb的DNA序列,其靈敏度與放射性探針相當;
5、 多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列;
6、 既可以在玻片上顯示中期染色體數量或結構的變化,也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結構。


 

應用范圍
 

該技術不但可用于已知基因或序列的染色體定位,而且也可用于未克隆基因或遺傳標記及染色體畸變的研究。
在基因定性、定量、整合、表達等方面的研究中頗具優勢。

 
 
 
 
 
 

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